常规免疫组化染色
免疫组化染色流程
组织样本准备
组织固定
组织切片
染色前准备
脱蜡
水化及抗原修复
染色
封闭一抗
二抗显色
复染
苏木素脱水
盖玻片
组织样本准备
组织固定
时间
12-48小时立即固定
温度
室温
方法
10%中性福尔马林缓冲液（NBF）
体积
15-20倍组织体积
泰立瑞顺应最新的趋势，推出 无酸乙二醛（GAF）作为福尔马林的替代品。GAF是一种无毒、不致癌的固定液，相比10%NBF，GAF具有同等（甚至更好）的组织固定效果
  • 固定目标
    优先用方法
  • 固定目标
    10%NBF，最常用
  • 酶
    冰冻切片
  • 核酸
    乙醇
  • 脂类
    冰冻切片、戊二醛
10%NBF
  • 抗体穿透
    差
  • 免疫原性
    差
  • RNA质量
    差
  • RNA产量
    低
  • 形态保持
    等同
  • 固定速度
    慢
  • 抗原修复
    必须
  • GAF
  • 好
  • 好
  • 好
  • 高
  • 等同
  • 快
  • 多数不必须
染色前准备
传统方法
30分钟
脱蜡
石蜡被二甲苯去除
30分钟
水化
2x100%，1x95%，1x50%乙醇，每次5分钟
30分钟
抗原修复
暴露抗原决定簇
一共花费90分钟，使用有毒二甲苯
泰立瑞方法和产品
将脱蜡、水化、抗原修复一步完成
含EDTApH 9.0
TR脱蜡抗原修复液10x（CB9）
含CitratepH 6.0
TR脱蜡抗原修复液10x（CB6）
花费35分钟,无二甲苯
染色
封闭/一抗
类型
解决问题
3%H₂O₂封闭
肾脏、肝、红细胞等组织辣根过氧化物酶HRP
血清封闭
使用与二抗同一种属的动物血清，避免二抗与组织中免疫球蛋白的非特异性结合
泰立瑞产品
TR-H₂O₂封闭液（3%）
TR-血清封闭液
封闭时间：5-15分钟
不充分的封闭导致高背景染色
大多数封闭应在一抗孵育前。在某些情况下，封闭可能损伤或破坏抗原表位，此时建议封闭是在一抗孵育后进行。
二抗/显色/复染