三级淋巴结构（tertiary lymphoid structure，TLS）分析至少包含四层信息：是否符合识别规则、有多少及多大、位于什么位置、由哪些细胞及状态构成。只记录“TLS阳性”，无法判断两个样本是否具有相似的免疫组织结构。
先说明研究对象和TLS的识别条件
Markovits等2025年的研究分析16例头颈鳞癌FFPE样本，其中HPV阳性7例、阴性9例，采用37抗体多重免疫荧光panel。以下规则与观察属于该队列，不能直接替代其他癌种的TLS标准。
- 从CD21阳性B细胞和树突状细胞的高密度区域识别生发中心候选区，原研究要求面积至少500 μm²。
- 识别富含B细胞、CD4 T细胞、树突状细胞和浆细胞的淋巴聚集体。
- 将生发中心向外扩展100 μm，再与淋巴聚集体求交集；交集面积超过20,000 μm²时归为TLS。
- 排除距离最近肿瘤区域超过1,000 μm的结构，并复核组织背景，减少混入非肿瘤相关淋巴组织。
把数量、位置、组成和状态分开记录
| 层面 | 建议记录 | 解释前提 |
|---|---|---|
| 数量与大小 | TLS数、面积、TLS阳性切片及患者数 | 说明取样面积与每位患者贡献的切片数；结构总数不是患者数。 |
| 空间位置 | 到肿瘤的连续距离、所在区室 | 先固定距离算法，不能把轮廓最短距离与细胞平均距离混用。 |
| 细胞组成 | B/T细胞、浆细胞、髓系细胞等比例 | 明确分母是TLS内全部细胞还是某一谱系细胞。 |
| 功能相关状态 | 已测marker的阳性比例和组合 | 标记表达提供状态线索，不能直接证明抗肿瘤功能。 |
该研究中，两组各有4例样本检测到TLS；HPV阳性组识别29个TLS、阴性组11个。按TLS阳性样本比较数量的p值为0.11，不能据此断言前者普遍更多。研究还观察到距离、细胞组成和活化相关状态差异，说明“有无”和“多少”只是分析起点。
位置差异需要和细胞状态一起看
HPV阳性肿瘤中的TLS整体更靠近肿瘤，并出现与活化或记忆相关的淋巴细胞特征；HPV阴性组可见不同的髓系及免疫调节相关组成。不同分组轴要分开：HPV阳性/阴性是患者属性，邻近/远端是结构的距离分类。相关图中的一个TLS并不等于一名独立患者。
具体的距离口径、200 μm边界和教学算例见TLS到肿瘤的距离计算专题。这项小队列缺少抗PD-1治疗结局，不能直接用于预测疗效。
开始分析前准备哪些信息
- 写明TLS识别目标：一般淋巴聚集体、含生发中心的结构，还是成熟度分层。
- 提供panel、像素尺度、肿瘤区域和排除区，并保存区域人工复核记录。
- 预先确定面积、数量、组成和状态的分母及患者级汇总方式。
- 先复核密集细胞区的分割与表型；没有足够状态marker时，不补写功能结论。
软件分析环节可查看TR-Seg细胞分割、TR-PhenoClass表型分析和TR-Spa组织空间解码的介绍；密集区域能否可靠分析仍需代表图评估与人工复核。需要项目协作时，可通过图像分析服务沟通样本结构和预期输出。
参考文献与资料
内容整理：terrydr｜本文于2026年10月20日更新。文献结果归原研究作者；教学模板、分析建议和软件介绍按文中说明使用。